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0000C57小鼠的由来 C57BL作为小鼠品系中广泛应用的代表,其名称中的BL源自英文Black,意指该品系小鼠以黑色外观显著区别于其他品系。 C57BL涵盖多个科研常用的亚系,如C57L、C57BL/6、C57BL/10,其中C57BL/6尤为普遍,这些小鼠常被简称为黑鼠或黑色小鼠。但需注意的是,此类称呼易引起混淆:提及实验用黑小鼠时,虽常指C57BL/6,却非绝对。 另外,C57BL/6亚系内还包含多种基因型小鼠,其命名习惯是在6后附加字母,例如C57BL/6J、C57BL/6N,因此仅凭黑色外观无法确0000日文文献,推荐于类似于唐帕翻译的专业文档翻译平台,支持语言多,保持原文格式。0000000120001. 上样:样品加载: 上样量:细胞:10ug,组织:20ug,标记物上样量:2ul。 2. 电泳:分离胶浓度:常见有10%、9%和6%(大分子量选用浓度较低的胶,小分子量则相反)。浓缩胶浓度:5%。 电泳缓冲液配制:将100ml母液加入900ml蒸馏水,再加入1g SDS。 电泳条件:运行浓缩胶条件为80v,40min;运行分离胶条件为120v,50min。 3. 转膜:电转液:100ml母液+700ml蒸馏水+200ml甲醇(1)将PVDF膜在100%甲醇中浸泡10秒至15秒。 (2)倒入配置好的转印缓冲液于平底托盘中,将03分子克隆实验——无缝克隆 今天和大家讲讲无缝克隆常见的问题以及解决方法。 1.平板上很少或者没有克隆菌落 建议使用试剂盒附带的阳性对照,可排除试剂盒本身的影响。进一步判定,主要有以下可能的情况和建议: 01载体制备 线性化载体和插入片段的纯度不够,抑制反应。 02插入片段制备 1、引物设计不正确:同源臂15~25nt(不计算酶切位点),CG含量40~60%。 2、线性化载体和插入片段的纯度不够,抑制反应。若线性化载体与插入片段已经过纯化,00000000什么是RNA提取 细胞中的RNA可以分为信使RNA、转运RNA和核糖体RNA三大类,不同组织总RNA提取的实质就是将细胞裂解,释放出RNA,并通过不同方式去除蛋白,DNA等杂质,最终获得高纯度RNA产物的过程。 RNA提取的使用目的 通过总RNA提取可获得高纯度及高质量的总RNA,可用于实时荧光定量PCR、Northern blot、microRNA检测、芯片分析, DNA文库构建,基因克隆等实验。RNA用于不同的后续实验,其质量要求不尽相同。 cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留; Northern对RNA完整01一般这类行业资料,包括医学、教育、科技行业的很多资料只要阅读就可以了,可以试试用一些比如像唐帕文档翻译的平台试试,这种效率挺高的000一、PCR反应组分 1.模板DNA: 来源比较广,用于复制的PCR模板可以是任何DNA来源,如基因组DNA(gDNA)、互补DNA(cDNA)和质粒DNA。不过,DNA的组成或复杂度会影响PCR扩增的最佳起始量。例如,在起始量为50 µL 的PCR中,只需0.1–1 ng质粒DNA,而gDNA则需要5–50 ng。最佳模板起始量还取决于所使用的 DNA 聚合酶类型;经过改造 的DNA聚合酶对模板的亲和力更强,灵敏度更高,所需的DNA起始量更少。对DNA起始量的优化很重要,因为起始量过高会增加发生非特异性扩0那么,当我们遭遇支原体污染时,该如何应对呢?今天,让我们一起来探讨这个困扰。 支原体是一种直径大小仅为0.1-0.3μm,无细胞壁,可轻松透过一般过滤膜混入培养系统中的最小最简单的原核生物,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状,分枝状等多种态。它不同于细菌,也不同于病毒,种类繁多,分布广泛,所以防不胜防! 先看下支原体污染的检测方法,以下是一些常用的检测技术: 1 DNA染色法:使用如Hoechst 33258或DAPI这类荧光染料对细胞核DNA进01 总述实时荧光定量PCR(后续简称为qPCR)顾名思义就是在PCR反应体系中加入荧光物质,通过荧光信号的实时接收监测PCR反应进程,由于其模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,以此为依据进而达到定量的目的。简单来讲,qPCR可分为荧光染料法(以SYBR GreenⅠ最常用)与荧光探针法(TaqMan 探针)两种,而其结果分析方法也有绝对定量和相对定量之分。在此不一一赘述,此次分享以SYBR GreenⅠ法为例,结果分析选用相对定量法。 2 实验设计2.1 总0苏木精-伊红染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining ),简称HE染色法 ,切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 实验步骤: 1、取样固定 取新鲜的组织样品,加入4 %多聚甲醛组织固定液的EP管中。取样材料应该小而薄,约黄豆粒大小。 2、脱水 采用梯度酒精浓度法脱水。通常选择50%-60%-70%-90%-95%-100%的浓度梯度,各酒精浓度要求准确,95%2借着我的第一篇SCI成功发表来谈谈语言润色 自己的第一篇SCI,从开始有思路到下笔到整理成文一路艰苦自不必说,关键是我原始手稿很多语病,贸然发表显然会直接悲剧。后来别人推荐,找了AJE润色我的文章,前后润色两次,AJE非常仔细的修改,具备很高的效率,例如提交的时候便提前告知我预期修改完成日期,结果提前一天完成,十分准时,而且质量超级棒,提供润色证书,可以提交给杂志社给人以重视的态度,更利于文章接受。总之感觉服务十00小伙伴们早上好,今天聊下玄学实验-Western blot,如果在实验中没有观察到阳性条带或者条带较弱,可能有多种原因导致这种情况。以下是一些可能的原因及其解决方法: 1 蛋白质表达量低:目标蛋白在样本中的表达量可能低于检测限,导致条带弱或不可见。 解决方法:使用更多的细胞或组织样本,或者增加蛋白的加载量。 2 不适当的抗体:使用的一抗或二抗可能特异性不强,或者稀释比例不当。 解决方法:验证抗体的特异性,优化抗体稀释比例。 30如果在实验中没有观察到阳性条带或者条带较弱,可能有多种原因导致这种情况。以下是一些可能的原因及其解决方法: 1 蛋白质表达量低:目标蛋白在样本中的表达量可能低于检测限,导致条带弱或不可见。 解决方法:使用更多的细胞或组织样本,或者增加蛋白的加载量。 2 不适当的抗体:使用的一抗或二抗可能特异性不强,或者稀释比例不当。 解决方法:验证抗体的特异性,优化抗体稀释比例。 3 样本处理不当:样本在裂解、煮沸或电泳过程中00一、PCR反应组分 1.模板DNA: 来源比较广,用于复制的PCR模板可以是任何DNA来源,如基因组DNA(gDNA)、互补DNA(cDNA)和质粒DNA。不过,DNA的组成或复杂度会影响PCR扩增的最佳起始量。例如,在起始量为50 µL 的PCR中,只需0.1–1 ng质粒DNA,而gDNA则需要5–50 ng。最佳模板起始量还取决于所使用的 DNA 聚合酶类型;经过改造 的DNA聚合酶对模板的亲和力更强,灵敏度更高,所需的DNA起始量更少。对DNA起始量的优化很重要,因为起始量过高会增加发生非特异性扩