鉴于大家对科学的好奇和渴望，战斗在科研第一线的在下，灰常高兴能用一些小问题来诱发各位的头脑风暴。在下乃合肥南七技校的烟酒僧，主攻细胞生物学，所以问题会偏向于这方面。还请大家多多捧场
我尽量把问题科普化~
讨论第二弹：话说细胞生物学的实验基础，其实是分子克隆，说白了就是构建质粒
一般的顺序是，①从mRNA序列获得cDNA序列（NCBI.org）→②设计引物（全场和片段）和酶切位点→③PCR扩增→④酶切扩增片段和载体→⑤连接和转化进入大肠杆菌→⑥抗生素筛选→⑦检测重组质粒→⑧表达检测
问题就来了，
1、mRNA和cDNA的区别是什么？（cDNA就是。。。百度吧，此问题乃热身活动）
2、如何设计酶切位点以保证插入的基因是正确的？（因为有人问过单酶切可能会颠倒顺序，而且还有别的因素要考虑呢在克隆的序列里面。。。）
3、质粒的表达有两种类型，真核表达和原核表达，那么，筛选的时候是哪种表达？表达检测的时候又是哪种表达？设计下用什么实验完成筛选和表达检测（大概一步就能验证）
专业人士请慢答，多谢~
我尽量把问题科普化~讨论第二弹：话说细胞生物学的实验基础，其实是分子克隆，说白了就是构建质粒
一般的顺序是，①从mRNA序列获得cDNA序列（NCBI.org）→②设计引物（全场和片段）和酶切位点→③PCR扩增→④酶切扩增片段和载体→⑤连接和转化进入大肠杆菌→⑥抗生素筛选→⑦检测重组质粒→⑧表达检测
问题就来了，
1、mRNA和cDNA的区别是什么？（cDNA就是。。。百度吧，此问题乃热身活动）
2、如何设计酶切位点以保证插入的基因是正确的？（因为有人问过单酶切可能会颠倒顺序，而且还有别的因素要考虑呢
在克隆的序列里面。。。）3、质粒的表达有两种类型，真核表达和原核表达，那么，筛选的时候是哪种表达？表达检测的时候又是哪种表达？设计下用什么实验完成筛选和表达检测（大概一步就能验证）
专业人士请慢答，多谢~
