最近有很多朋友询问我关于多肽合成的一些问题,所以今天我挑了其中的主要几个问题来跟大家讲一讲,首先有人问多肽合成的基本原理是什么,以下是详细内容:
1.多肽合成的基本原理:
目前多肽合成主要使用的是化学合成法,其中固相合成法是一个重大的突破,主要特点是不需要纯化中间的产物,并且合成的过程可以连续的进行,这就为多肽合成的自动化奠定了基础,所以现在全自动多肽的合成使用的主要就是固相合成法。
固相合成法的基本过程是:基于FMOC化学生成,首先把要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键的形式和一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这个氨基酸的氨基作为多肽合成的起点,和其他氨基酸已经活化的羧基作用,从而形成肽键并且不断反复这个过程从而得到了多肽,并且根据多肽的氨基酸组成不同,之后的处理方式、纯化方式也有所不同。
2.如何溶解多肽?
这是一件复杂的工序,主要的难点在于确定合适的溶剂,一般我们会先取一点来做试验确定溶剂:
判定多肽的电荷特定,设定酸性氨基酸ASP、GLU和C端COOH为-1,碱性的氨基酸LYS、ARG、N端NH2为+1,其他氨基酸为0,从而计算出净电荷数:
①如果净电荷数>0,多肽为碱性,用水溶解,如果出现不溶解或者溶解性不大的情况,可以加入10%以上的醋酸,还不行就在加入少量的TFA溶解,再加入500ul水稀释。
②如果净电荷数<0,多肽为酸性,用水溶解,如果不溶解或者溶解性不大,可以加入25ul的氨水再加入500ul的水。
③如果净电荷数=0,多肽为中性,可以使用有机溶剂来进行溶解,比如乙晴、甲醇等。
3.如何从多肽序列中判定多肽的溶解性?
①多肽中如果有高比例的疏水性很强的氨基酸,比如LEU、VAL、IIE、MET等,这样的多肽很难溶解于水性溶液中,无论是纯化还是多肽合成都会有问题。
②一般情况疏水性的氨基酸比例<50%,不能连续五个连续aa为疏水性,带电荷的氨基酸的比例达到了20%,并且在多肽的N或者C端如果能够增加极性的氨基酸也可以改善其溶解性。
以上就是几个关于多肽合成的几个问题,也是目前大家问的最多的问题,可能有些问题我没能回答有机会在跟大家讲述,如果您想了解更多有关多肽合成的内容,欢迎访问三羊开肽的官方网站!
1.多肽合成的基本原理:
目前多肽合成主要使用的是化学合成法,其中固相合成法是一个重大的突破,主要特点是不需要纯化中间的产物,并且合成的过程可以连续的进行,这就为多肽合成的自动化奠定了基础,所以现在全自动多肽的合成使用的主要就是固相合成法。
固相合成法的基本过程是:基于FMOC化学生成,首先把要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键的形式和一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这个氨基酸的氨基作为多肽合成的起点,和其他氨基酸已经活化的羧基作用,从而形成肽键并且不断反复这个过程从而得到了多肽,并且根据多肽的氨基酸组成不同,之后的处理方式、纯化方式也有所不同。
2.如何溶解多肽?
这是一件复杂的工序,主要的难点在于确定合适的溶剂,一般我们会先取一点来做试验确定溶剂:
判定多肽的电荷特定,设定酸性氨基酸ASP、GLU和C端COOH为-1,碱性的氨基酸LYS、ARG、N端NH2为+1,其他氨基酸为0,从而计算出净电荷数:
①如果净电荷数>0,多肽为碱性,用水溶解,如果出现不溶解或者溶解性不大的情况,可以加入10%以上的醋酸,还不行就在加入少量的TFA溶解,再加入500ul水稀释。
②如果净电荷数<0,多肽为酸性,用水溶解,如果不溶解或者溶解性不大,可以加入25ul的氨水再加入500ul的水。
③如果净电荷数=0,多肽为中性,可以使用有机溶剂来进行溶解,比如乙晴、甲醇等。
3.如何从多肽序列中判定多肽的溶解性?
①多肽中如果有高比例的疏水性很强的氨基酸,比如LEU、VAL、IIE、MET等,这样的多肽很难溶解于水性溶液中,无论是纯化还是多肽合成都会有问题。
②一般情况疏水性的氨基酸比例<50%,不能连续五个连续aa为疏水性,带电荷的氨基酸的比例达到了20%,并且在多肽的N或者C端如果能够增加极性的氨基酸也可以改善其溶解性。
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