干细胞诱导分化服务：
干细胞诱导分化是诱导干细胞定向分化，使之成为成熟的功能细胞，是目前干细胞研究的关键环节。
干细胞是一种未充分分化，具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定诱导条件下，可以分化为成骨细胞、成软骨细胞和成肌细胞等，还可以分化为巨噬细胞、脂肪细胞、内皮细胞和成纤维细胞等骨髓基质细胞，具有发育为骨、软骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基质等中胚层组织的潜能。
干细胞体外定向诱导分化的原理，就是选择适当的诱导剂和诱导模式，通过诱导物与细胞表面受体结合或使细胞发生轻度可逆性损伤等，使被诱导细胞按预定的细胞类型方向分化，然后将这些定向分化的细胞进行分离和培养传代，从而得到人们所需要的细胞类型。
成骨诱导分化、成脂诱导分化、成软骨诱导分化效果图
流式鉴定效果图
提供40倍、100倍、200倍等各种染色图片
提供流式指标鉴定，包括对 CD105、90、45、34、CD73和HLA-DR六个指标进行鉴定服务，赛百慷技术纯属、经验丰富、时间短、数据可靠。
成骨诱导分化
成骨诱导分化操作规程
所需材料
0.25%Trypsin-0.02%EDTA
1×PBS
iCell 骨髓间质干细胞完全培养基
iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化完全培养基操作
注：本操作规程以六孔板为例
1. 将 iCell 骨髓间质干细胞置于 37℃，5% CO2 的培养箱中培养。
2. 当细胞融合度达到 80-90%时，用 0.25%Trypsin-0.02%EDTA 进行消化。
3. 将消化下来的骨髓间质干细胞按照 1×105 cells/cm2 的细胞密度接种在事先包被基质胶的六孔板中，每孔加入 2 mL 完全培养基。。
4. 将细胞置于 37℃，5% CO2 的培养箱中进行培养。
5. 当细胞融合度达到 60%-70%时，小心的将孔内完全培养基吸走，向六孔板中加入2 mL iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化完全培养基。
6. 每隔 3 天换用新鲜的 iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化完全培养基（使用前需预热至 37℃）
7. 诱导 2-4 周后，视细胞的形态变化及生长情况，用茜素红进行染色。
注：为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每两天一次半量换液。
茜素红染色分析
所需材料
1×PBS
4%中性甲醛溶液
茜素红染液
实验步骤
1. 成骨诱导分化结束后，吸走六孔板中的成骨诱导分化完全培养基，用 1×PBS 冲洗
1-2 次。每孔加入 2 mL 4%中性甲醛溶液，固定 30 min。
2. 吸走中性甲醛溶液，用 1×PBS 冲洗 2 次。每孔中加入 1 mL 茜素红染液染 3-5 min。
3. 吸走茜素红染液，用 1×PBS 冲洗 2-3 次。
4. 将培养板置于显
5. 微镜下观察成骨染色效果。
成软骨诱导分化
成软骨诱导分化操作规程
1. 进行成软骨诱导分化实验之前，需要对常规消化后的细胞进行计数。
2. 将3-4×10 5个细胞转移到15 mL离心管中，250 g离心4 min。
3. 吸去上清。加入0.5 mL预混液，重悬上一步离心所得沉淀，以清洗ICELL间质干细胞，室温下150 g离心5 min。
4. 重复步骤3，再次清洗细胞。
5. 将上一步所得沉淀用0.5 mL 间质干细胞成软骨诱导分化完全培养基重悬。
6. 室温下150 g离心5 min。
7. 拧松离心管盖以便于气体交换，将其放置于37℃，5% CO2的培养箱中培养。
注意：
1 此步骤不需要吸掉上清并重悬细胞。
2 24 小时之内不要摇动离心管。
8. 当细胞团出现聚拢现象时（一般为24 h或48 h后，实际视细胞生长情况而定）轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。
9. 自接种开始计算，每隔2-3 d 给细胞换用新鲜的成软骨诱导分化完全培养基，每管约0.5 mL成软骨诱导分化完全培养基。
注意：小心操作，不要吸出软骨球。
10. 换液之后，轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。稍加拧松离心管盖放入37℃，5% CO2的培养箱中继续诱导培养。
11. 一般持续诱导21-28天后，可对软骨球进行福尔马林固定和石蜡包埋切片，最后进行阿利辛蓝染色。
阿利辛蓝染色分析
1. 软骨球经石蜡包埋后切片。
2. 染色步骤：
a) 脱蜡和脱水；
b) 阿利辛蓝染液染色30 min；
c) 自来水冲洗2 min；
d) 蒸馏水冲洗1次。
3. 显微镜下观察阿利辛蓝染色效果，阿利辛蓝染色部分显示的是软骨组织中的内酸性粘多糖。
成脂诱导分化
成脂诱导分化操作规程
所需材料
0.25%Trypsin-0.04%EDTA
Phosphate-BufferedSaline (1×PBS)
iCell脂肪间质干细胞完全培养基
iCell脂肪间质干细胞成脂诱导分化完全培养基
操作
注意：本操作规程以六孔板为例
1. 将iCell脂肪间质干细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中培养。
2. 当细胞融合度达到80%-90%时，用0.25%Trypsin-0.04%EDTA进行消化。
3. 将消化下来的间质干细胞按照2×104 cells/cm2的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入2 mL完全培养基。
4. 将细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中进行培养。
5. 每隔三天换液，直到细胞融合度达到100%或者过融合。
6. 小心地将间质干细胞完全培养基吸走，向六孔板中加入2 mL iCell 脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基 A 液。
7. 诱导3天后，吸走六孔板中的A液，加入2 mL iCell 脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基B液。
8. 24h后，吸走B液，换回A液进行诱导。
9. A液和B液交替作用3-5次后（12-20天），继续用 B 液维持培养4-7天直到脂滴变得足够大、圆。B 液维持培养期间，每隔2-3天需要换用新鲜的B液。
油红O染色分析
所需材料
Phosphate-BufferedSaline (1×PBS)
4%中性甲醛溶液
油红O染液
操作
1. 成脂诱导分化结束后，吸走六孔板中的间质干细胞成脂诱导分化培养基，用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入2 mL 4%中性甲醛溶液，固定30 min。
2. 吸走中性甲醛溶液，用1×PBS冲洗2次。每孔中加入1 mL油红O染料工作液染色30min（工作液配制方法：油红O贮存液:蒸馏水=3:2，混匀后用中性滤纸过滤即可）。
3. 吸走油红O染液，用1×PBS冲洗2-3次。
4. 将培养板置于显微镜下观察成脂染色效果
干细胞诱导分化是诱导干细胞定向分化，使之成为成熟的功能细胞，是目前干细胞研究的关键环节。
干细胞是一种未充分分化，具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定诱导条件下，可以分化为成骨细胞、成软骨细胞和成肌细胞等，还可以分化为巨噬细胞、脂肪细胞、内皮细胞和成纤维细胞等骨髓基质细胞，具有发育为骨、软骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基质等中胚层组织的潜能。
干细胞体外定向诱导分化的原理，就是选择适当的诱导剂和诱导模式，通过诱导物与细胞表面受体结合或使细胞发生轻度可逆性损伤等，使被诱导细胞按预定的细胞类型方向分化，然后将这些定向分化的细胞进行分离和培养传代，从而得到人们所需要的细胞类型。
成骨诱导分化、成脂诱导分化、成软骨诱导分化效果图
流式鉴定效果图
提供40倍、100倍、200倍等各种染色图片
提供流式指标鉴定，包括对 CD105、90、45、34、CD73和HLA-DR六个指标进行鉴定服务，赛百慷技术纯属、经验丰富、时间短、数据可靠。
成骨诱导分化
成骨诱导分化操作规程
所需材料
0.25%Trypsin-0.02%EDTA
1×PBS
iCell 骨髓间质干细胞完全培养基
iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化完全培养基操作
注：本操作规程以六孔板为例
1. 将 iCell 骨髓间质干细胞置于 37℃，5% CO2 的培养箱中培养。
2. 当细胞融合度达到 80-90%时，用 0.25%Trypsin-0.02%EDTA 进行消化。
3. 将消化下来的骨髓间质干细胞按照 1×105 cells/cm2 的细胞密度接种在事先包被基质胶的六孔板中，每孔加入 2 mL 完全培养基。。
4. 将细胞置于 37℃，5% CO2 的培养箱中进行培养。
5. 当细胞融合度达到 60%-70%时，小心的将孔内完全培养基吸走，向六孔板中加入2 mL iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化完全培养基。
6. 每隔 3 天换用新鲜的 iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化完全培养基（使用前需预热至 37℃）
7. 诱导 2-4 周后，视细胞的形态变化及生长情况，用茜素红进行染色。
注：为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每两天一次半量换液。
茜素红染色分析
所需材料
1×PBS
4%中性甲醛溶液
茜素红染液
实验步骤
1. 成骨诱导分化结束后，吸走六孔板中的成骨诱导分化完全培养基，用 1×PBS 冲洗
1-2 次。每孔加入 2 mL 4%中性甲醛溶液，固定 30 min。
2. 吸走中性甲醛溶液，用 1×PBS 冲洗 2 次。每孔中加入 1 mL 茜素红染液染 3-5 min。
3. 吸走茜素红染液，用 1×PBS 冲洗 2-3 次。
4. 将培养板置于显
5. 微镜下观察成骨染色效果。
成软骨诱导分化
成软骨诱导分化操作规程
1. 进行成软骨诱导分化实验之前，需要对常规消化后的细胞进行计数。
2. 将3-4×10 5个细胞转移到15 mL离心管中，250 g离心4 min。
3. 吸去上清。加入0.5 mL预混液，重悬上一步离心所得沉淀，以清洗ICELL间质干细胞，室温下150 g离心5 min。
4. 重复步骤3，再次清洗细胞。
5. 将上一步所得沉淀用0.5 mL 间质干细胞成软骨诱导分化完全培养基重悬。
6. 室温下150 g离心5 min。
7. 拧松离心管盖以便于气体交换，将其放置于37℃，5% CO2的培养箱中培养。
注意：
1 此步骤不需要吸掉上清并重悬细胞。
2 24 小时之内不要摇动离心管。
8. 当细胞团出现聚拢现象时（一般为24 h或48 h后，实际视细胞生长情况而定）轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。
9. 自接种开始计算，每隔2-3 d 给细胞换用新鲜的成软骨诱导分化完全培养基，每管约0.5 mL成软骨诱导分化完全培养基。
注意：小心操作，不要吸出软骨球。
10. 换液之后，轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。稍加拧松离心管盖放入37℃，5% CO2的培养箱中继续诱导培养。
11. 一般持续诱导21-28天后，可对软骨球进行福尔马林固定和石蜡包埋切片，最后进行阿利辛蓝染色。
阿利辛蓝染色分析
1. 软骨球经石蜡包埋后切片。
2. 染色步骤：
a) 脱蜡和脱水；
b) 阿利辛蓝染液染色30 min；
c) 自来水冲洗2 min；
d) 蒸馏水冲洗1次。
3. 显微镜下观察阿利辛蓝染色效果，阿利辛蓝染色部分显示的是软骨组织中的内酸性粘多糖。
成脂诱导分化
成脂诱导分化操作规程
所需材料
0.25%Trypsin-0.04%EDTA
Phosphate-BufferedSaline (1×PBS)
iCell脂肪间质干细胞完全培养基
iCell脂肪间质干细胞成脂诱导分化完全培养基
操作
注意：本操作规程以六孔板为例
1. 将iCell脂肪间质干细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中培养。
2. 当细胞融合度达到80%-90%时，用0.25%Trypsin-0.04%EDTA进行消化。
3. 将消化下来的间质干细胞按照2×104 cells/cm2的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入2 mL完全培养基。
4. 将细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中进行培养。
5. 每隔三天换液，直到细胞融合度达到100%或者过融合。
6. 小心地将间质干细胞完全培养基吸走，向六孔板中加入2 mL iCell 脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基 A 液。
7. 诱导3天后，吸走六孔板中的A液，加入2 mL iCell 脂肪间质干细胞成脂诱导分化培养基B液。
8. 24h后，吸走B液，换回A液进行诱导。
9. A液和B液交替作用3-5次后（12-20天），继续用 B 液维持培养4-7天直到脂滴变得足够大、圆。B 液维持培养期间，每隔2-3天需要换用新鲜的B液。
油红O染色分析
所需材料
Phosphate-BufferedSaline (1×PBS)
4%中性甲醛溶液
油红O染液
操作
1. 成脂诱导分化结束后，吸走六孔板中的间质干细胞成脂诱导分化培养基，用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入2 mL 4%中性甲醛溶液，固定30 min。
2. 吸走中性甲醛溶液，用1×PBS冲洗2次。每孔中加入1 mL油红O染料工作液染色30min（工作液配制方法：油红O贮存液:蒸馏水=3:2，混匀后用中性滤纸过滤即可）。
3. 吸走油红O染液，用1×PBS冲洗2-3次。
4. 将培养板置于显微镜下观察成脂染色效果
