01实验目的
基因表达是生物学研究中的重要内容之一，而基因表达载体则是基因表达研究中不可或缺的工具。基因表达载体是一种能够将外源基因导入到细胞中并使其表达的DNA分子。在细胞内，基因表达载体可以通过转录和翻译的过程将外源基因转化为蛋白质，从而实现基因表达。
02实验原理
表达载体是用来在受体细胞中表达外源基因的载体，原核表达载体通常为质粒，表达载体除具有克隆载体所具有的性质以外，还应具有表达元件（转录和翻译所必须的DNA序列）。
大肠杆菌表达载体要求：①有一个强的启动子及其两侧的调控序列；②应有SD序列，且SD序列与起始密码子ATG之间要有合适的距离；③在克隆基因与启动子之间有正确的阅读框架；④外源基因下游应加入不依赖ρ因子的转录终止区。
构建好表达载体之后，提取重组载体的质粒，然后用质粒进行表达宿主菌的转化。
03实验步骤
1.目的片段的获取
1.1 引物设计
在NCBI上查找目的基因SD序列，使用Primer 5软件进行引物的设计，在设计引物时须引入合适的酶切位点和保护性碱基
1.2琼脂糖凝胶电泳
根据目的条带大小配置相应浓度的琼脂糖凝胶，微波炉加热完全溶解后，冷却至60℃左右，按照1：10000加入核酸染料，混匀后倒入凝胶铸槽中，插入梳子，除去气泡，待完全凝固后拔出梳子。
将凝胶置于电泳槽中，加样孔放置于负极，进行加样（选取合适的DNA Marker），根据DNA Marker指示条带在凝胶上的位置决定电泳是否终止，然后将凝胶放置在凝胶成像仪中切胶回收。
2. 目的片段和表达载体的连接（以T4连接为例）
不同的表达载体具有不同的优势，在分析基因序列之后可以选择最佳的表达系统进行重组表达质粒构建。因科研需求，需要pET系列、pGEX系列、pCold(BL21分子伴侣)系列等原核表达载体。