检测发现敲低MYH9同样仅下调SNAIL的蛋白水平（图1a-b）。为了进一步验证MYH9的作用机制，用Biogrid分析候选互作蛋白，发现USP45和SNAIL是MYH9的候选互作蛋白。内源Co‐IP实验分析表明MYH9可分别与USP45、SNAIL和泛素互作，Co-IP实验还发现USP45敲低可改善MYH9对SNAIL的去泛素化和稳定性的影响（图1c-d）。同样MYH9也能改变CHX和MG132处理的SOC细胞中SNAIL的稳定性（图1e）。表明MYH9与USP45、SNAIL和泛素互作，并通过USP45影响SNAIL蛋白的稳定性。 进一步的功能回复实验结果，

《Adv Sci》解读：MYH10与MYH9结合Biogrid分析发现MYH9是MYH10的候选互作蛋白。早期研究已证实MYH9通过调节Wnt/β-catenin通路和EMT信号促进 浆液性卵巢癌（ SOC ）的增殖和转移。外源和内源Co‐IP实验显示MYH10功能域与MYH9互作（图1a-d）。GST pull-down分析也表明MYH10可与MYH9直接结合（图1b）。临床样本分析发现MYH10和MYH9水平正相关，MYH10+/MYH9+共表达是一个独立的预后因素（图1e）。结果表明MYH10与MYH9直接结合。 全文分享请查阅：【《Adv Sci》解读：泛素化机制还可以

为了探索ABLIM1调控IκBα/NF-κB分子机制，使用蛋白合成抑制剂放线菌酮(CHX)评估发现，ABLIM1过表达缩短了内源性IĸBα的半衰期（图2a）。结构域分析发现ABLIM1包含LIM和HP结构域，而LIM结构域蛋白具有与RING和PHD结构域相似的结构，被认为具有E3连接酶活性，靶向核p65。因此，推测ABLIM1可能与IĸBα相互作用，并促进其泛素化和随后的蛋白酶介导的降解。anti-ABLIM1 Co-IP实验发现，ABLIM1与IĸBα相互作用（图2b）。使用anti-IĸBα进行基于泛素的IP分析发现，ABLIM1促进

泛素E3连接酶ABLIM1致癌作用的详细分子机制为了探索ABLIM1致癌作用的详细分子机制。敲减ABLIM1，进行RNA-seq，KEGG分析发现NF-κB信号显著富集，且通路相关的前10个基因表达被抑制（图1a-b）。细胞核和细胞质蛋白检测发现，ABLIM1敲除抑制了细胞质p65及其核转位（图1c）。GEPIA2数据库中结直肠癌和正常结直肠组织中RELA表达水平与ABLIM1表达水平呈正相关（图1d），支持ABLIM1对p65的调控。 ABLIM1调节IκBα/NF-κB/CCL20的活化（Ref. Fig4） 全文分享可查阅：【《Cell Death D

乳腺癌就占女性癌症的31%。女性乳腺癌发病率一直在缓慢上升。三阴性乳腺癌（TNBC）恶性程度更高，且无有效治疗，预后差。精氨酸甲基化是一种关键的翻译后修饰（PTM），参与各种细胞过程。然而，关于CARM1在TNBC中的功能知之甚少。 2024年10月，中国医学科学院和首都医科大学基础医学院团队联合在Protein Cell（IF=13.6）上发表了题为“CARM1 drives triple-negative breast cancer progression by coordinating with HIF1A”的研究成果。揭示CARM1在TNBC中癌变的分子基础及其有效

此生唯爱生物！找不着工作我就考研，硕士不行，我就考博士！这辈子待在实验室我也乐意！

探索HKDC1调控PD-L1表达的机制Anti-Flag-HKDC1 IP-MS分析发现，候选互作分子中STAT1被预测为CD274转录因子（图1a）。然后，IP和GST下拉实验证实HKDC1可与STAT1结合（图1b-c）。同时，细胞实验表明STAT1是HKDC1介导PD-L1转录上调所必需的（图1d）。此外，WB检测发现HKDC1敲除显著减少STAT1的核转位（图1e）。磷酸化的STAT1残基Y701对其核转位和转录调节活性至关重要。WB分析发现HKDC1敲减STAT1-Y701磷酸化水平明显降低，该调控作用不受HKDC1己糖激酶活性的影响（图1f-h）。 结果

HKDC1如何促进STAT1-Y701磷酸化呢？IP分析发现，IFNγ刺激下，敲减HKDC1明显减弱STAT1与IFNγ受体1 (IFNGR1)的相互作用（图1a）。而Co-IP实验表明，IFNγ刺激下，HKDC1和STAT1可以与IFNGR1强相互作用（图1b）。结果表明HKDC1是STAT1募集到IFNGR1所必需的。 已知细胞质内的STAT1被募集到细胞质膜上的IFNGR上，残基Y701磷酸化，然后磷酸化的STAT1被转运到细胞核中启动下游转录。IP-MS数据分析发现HKDC1可能与参与信号转导的细胞骨架蛋白结合。Anti-Flag-HKDC1 Co-IP检测发现，HKDC1与ACTA

IP-MS分析，EZH2是多梳抑制复合体2 (PRC2)的功能性酶成分，与长期转录抑制相关。因此，确定EZH2为与Mi-2β蛋白复合物相关的染色质调节蛋白 (图2a)。内、外源性Co-IP表明EZH2和Mi-2β存在相互作用(图2b-c)，而EZH2敲减也显著上调Cxcl9和Cxcl10的水平(图2d)。 之前的研究表明， H3K27me3介导EZH2抑制ISGs的表达。体外证实EZH2沉默后，H3K27me3激活被显著抑制，且H3K27me3激活介导了由Mi-2β/EZH2复合物调控的ISG表达(图2e-g)。进一步ChIP分析证实，Mi-2β沉默后，Cxcl9和Cxcl10启动子区

为了确定Mi-2β如何影响黑色素瘤的免疫反应，进行微阵列分析。富集分析发现，Mi-2β敲除后，IFN-γ信号通路被激活（图1a），IFN-γ应答基因和抗原呈递基因上调（图1b）。IFN-γ在免疫治疗应答中起关键作用。Mi-2β沉默和抗PD-1治疗后Cxcl9和Cxcl10上调（图1c-e）。研究表明Mi-2β富集于基因组转录起始位点，在转录抑制中起重要作用。为了研究Mi-2β抑制IFN-γ信号的分子机制，进行ATAC-seq（染色质可及性），发现基因座内ATAC-seq峰的变化与IFN-γ信号相关（图1f）。

有点难受，本人是末流211，被调剂到生科，想转到另一个专业，但应该不可能了，很难受，听他们说生科本科就业几乎不可能，也不知道之后路怎么走了，哎

请问这个题怎么做呀？

调控蛋白检测：circRNA是由其母基因ABR外显子3-16的外显子通过反向剪接生成的。与正常的PDAC组织和细胞相比，GEM耐药的PDAC组织和细胞中circRNA的表达上调。文献表调研明，QKI、FUS和ADAR1多种蛋白质参与circRNA合成过程中的反向剪接。作者研究这些蛋白与GEM耐药PDAC组织中circRNA表达之间的相关性，发现QKI与circRNA的表达呈正相关。进一步在GEM耐药的PDAC细胞中沉默了QKI，发现circRNA的表达下调，但目基因ABR的表达不受影响。 这些表明：QKI可能参与促进circRNA的形

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三阴性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌中最恶性、预后最差的亚型。探索TNBC的新型致癌因素和治疗药物仍然是改善预后的重点。四氢姜黄素（THC）是姜黄素（CUR）的主要代谢产物，具有潜在的抗肿瘤活性。但THC在TNBC中的抗肿瘤活性和机制仍不清楚。 2024年11月4日，天津中医药大学康宁/邱峰/张强团队在Journal of Advanced Research（IF=11.4）上发表了题为“Tetrahydrocurcumin targets TRIP13 inhibiting the interaction of TRIP13/USP7/c-FLIP to mediate c-FLIP ubiquitination in triple-negative breast cancer

数据库分析筛选：通过FISH和核-细胞质RNA分离实验发现，circRNA主要分布在细胞核中。利用数据库（circAtlas2.0 database， ENCORI database; SPP database）分析发现，circRNA与LIG1启动子的结合蛋白有显著重叠，其中FOXA1是最显著的蛋白。进一步预测与FOXA1共同作用的蛋白，发现TET1与FOXA1结合。 调控互作复合体验证：在GEM耐药株中，CoIP验证FOXA1和TET1相互作用；进一步沉默FOXA1和TET1后，LIG1表达降低，证实在耐药株中FOXA1/TET1复合体协同调控LIG1表达。进一步通过ChIRP和RIP

在急性髓系白血病（AML）研究中，研究人员采用ChIP-seq技术探讨CCS1477对AML细胞EP300对增强子占位影响。通过比较药物处理和对照组细胞在1、2、6、48h多个时间点的EP300 ChIP信号，研究人员发现随着药物处理时间的变化，EP300占据位点的模式呈现不断演变的方式。EP300占位模式从最初1h内就开始出现，在前2h内仅有不到2%的EP300占位结合位点出现ChIP信号丢失；而到48h则出现丢失和新增（~10%）的混合模式（图1①）。 对EP300 ChIP强占位的位点（Top20%）进行基序富

组学发现：作者通过RNA-seq技术，检测沉默circRNA的PANC-1/GEM耐药株细胞与对照细胞，发现739个差异基因， 包括520个上调基因和219个下调基因。这些差异基因在多种DNA损伤修复通路中富集，包括碱基切除修复、错配修复和核苷酸切除修复。在这些通路中，包含显著下调的共同基因LIG1。LIG1是DNA连接酶家族的成员，在几乎所有DNA损伤修复通路中发挥着重要作用。 应答检测：在GEM抵抗的PDAC组织中，LIG1也高度表达，并且与PDAC组织中的circRNA表达呈正相关。沉默c

泛素Ub修饰共有7种类型：K63，K48，K33，K29，K27，K11和K6，最常见是K48修饰（蛋白酶体降解）和K63修饰（其它生物学过程）。为了确定由HECTD3介导的TRAF3多聚泛素化类型，构建不同Ub突变体进行Co-IP实验，结果发现只有Ub-K63（其它位点K都突变R）存在时，HECTD3促进TRAF3的多泛素化修饰（图1a-b）。相反Ub-K63R突变，HECTD3对TRAF3的泛素化修饰明显受到抑制（图1c）。结果表明，HECTD3介导TRAF3泛素化修饰主要是通过泛素K63处进行多聚泛素化修饰，促进I型IFN的产生。

据报道，TRAF3介导依赖和非依赖的I型IFN的产生，而STING诱导的TBK1激活可能与TRAF3相关。因此，HECTD3可能通过介导TRAF3激活来调控TRIF和STING依赖的信号传导。Co-IP分析显示HECTD3与TRAF3相互作用（图1a）。 找到互作是第一步，探索出互作的调控机制是最吸睛的地方，是机制研究精华！ 为了确定HECTD3是否通过其E3连接酶活性来调节TRAF3的激活，分析HECTD3介导的TRAF3多泛素化。Co-IP分析发现，HECTD3显著增加TRAF3多聚泛素化，表明HECTD3直接与TRAF3相互作用，并且是TRAF3

抑制LDHA活性会降低乳酸浓度并抑制α-MHC K1897乳酸化 据报道，LDHA可以调节细胞中乳酸的含量。Co-IP分析显示，抑制LDHA能减低α-MHC K1897的乳酸化（图1e-f）。心肌特敲LDHA后，K1897乳酰酸化降低（图1g）。类似地，LDHA抑制剂或Ang II处理减少了α-MHC K1897的乳酸化及α-MHC与Titin的相互作用；与单独使用Ang II治疗相比，当Ang II与LDHA抑制剂联合使用时，α-MHC K1897乳酸化和α-MHC-Titin的相互作用进一步降低（图1h-i）。 表明心力衰竭期间LDHA降低α-MHC K1897乳酸化。 图1 全

在环境条件（耐药）中，上游蛋白TRIM25的分子特征和调控机制 TRIM25在TMZ耐药中的分子状态发生了什么变化，从而影响了IPTKB蛋白积累？ 探索：TRIM25磷酸化位点发生变化。研究表明翻译后修饰(如磷酸化)在调节Trim25活性中起重要作用。为了探究Trim25在初发和复发GBM中功能差异的原因，通过磷酸化蛋白质组学检测分析，结果发现Trim25的S100位点磷酸化在复发样本中显著降低（图1a-b）。体外泛素化实验检测，结果显示Trim25被ALP去磷酸化时，ITPKB泛素化显著减

第一步，SIRT1与α-MHC互作，降低α-MHC乳酸化水平 使用p300酰基转移酶激活剂干预未能完全挽救α-MHC K1897乳酸化以及α-MHC-Titin相互作用。为进一步阐明调控机制，确定α-MHC K1897相关的脱酰酶。Sirtuin家族蛋白是关键的脱酰酶，选择SIRT1–7作为脱乳酸化α-MHC的候选蛋白，发现只有SIRT1显著降低α-MHC乳酸化水平（图2a-b）。体内和体外Co-IP实验显示，SIRT1与α-MHC相互作用（图2c-d）。构建α-MHC不同截断体并进行Co-IP实验，发现α-MHC与SIRT1相互作用的结构域为mmCoA、MIT-

p300是α-MHC K1897 乳酸化的酰基转移酶 第一步，p300过表达显著上调α-MHC的乳酸化 研究显示p300可以作为酰基转移酶，催化组蛋白的乳酸化。体外和体内Co-IP实验发现p300与α-MHC相互作用（图1e-f）。另外，体外和体内Co-IP实验证实，p300激活剂可以增强α-MHC K1897的乳酸化，而p300抑制剂减弱α-MHC K1897的乳酸化（图1g-j）。此外，在心衰和心肌损伤中，Co-IP分析显示，无论是否有Ang II刺激，p300与α-MHC在H9c2细胞和小鼠心肌组织中均相互作用且没有显著变化（图1k-l）

TRIM25是一种泛素连接酶，是否参与调控ITPKB蛋白稳定性积累呢？ 证据1：研究人员发现敲低Trim25，显著增加ITPKB蛋白积累；Trim25过表达则相反抑制其积累（图1a-b）。 证据2：加入蛋白酶体抑制剂MG132后，Trim25过表达诱导的ITPKB水平降低效应被逆转（图1c），表明Trim25通过蛋白酶体途径降低ITPKB的稳定性。 证据3：采用放线菌酮(CHX)追逐实验，发现Trim25敲低增加ITPKB蛋白的半衰期，Trim25过表达则相反（图1d-e）。 证据4：耐药细胞内源Co-IP分析显示Trim25敲低显著

TRPML1与ARL8B的结合是TRPML1介导的溶酶体胞吐和铁死亡抵抗所必需的 第一步，TRPML1与ARL8B互作 TRPML1过表达促进溶酶体在质膜上的对接和溶酶体胞吐。研究显示溶酶体通过与ARL8B和微管相关的激酶结合，从核周区转移到质膜。Co-IP分析显示TRPML1与ARL8B互作（图1d-e）。表明TRPML1可能通过与ARL8B结合，增强溶酶体向细胞膜的运动和溶酶体胞外分泌。 第二步，确定TRPML1与ARL8B互作的具体位置 为了找出TRPML1与ARL8B互作的具体位置。构建一系列ARL8B截断体，进行Co-IP实

如果我想研究人类基因，克隆，细胞体外培养，我要学生物工程，生物科学，生物科技的哪个。 还有我真的很想成为一名生物科学家。

TRIM25是一种泛素连接酶，是否参与调控ITPKB蛋白稳定性积累呢？ 证据1：研究人员发现敲低Trim25，显著增加ITPKB蛋白积累；Trim25过表达则相反抑制其积累（图1a-b）。 证据2：加入蛋白酶体抑制剂MG132后，Trim25过表达诱导的ITPKB水平降低效应被逆转（图1c），表明Trim25通过蛋白酶体途径降低ITPKB的稳定性。 证据3：采用放线菌酮(CHX)追逐实验，发现Trim25敲低增加ITPKB蛋白的半衰期，Trim25过表达则相反（图1d-e）。 证据4：耐药细胞内源Co-IP分析显示Trim25敲低显著

探索1：调控水平确认。研究发现ITPKB蛋白（不是mRNA水平）在复发性组织和TMZ耐药细胞中显著上调（图1a-b），表明ITPKB蛋白的升高是转录后调控的结果。 探索2：互作泛素酶筛选。CoIP-MS分析发现泛素连接酶Trim25可能为候选互作蛋白（图1c）。调控蛋白积累的互作蛋白，优选泛素连接酶，读者朋友们可以借鉴。 验证1：CoIP验证。内源anti-Trim25 Co-IP实验证实Trim25与ITPKB的结合，与敏感细胞相比，在耐药细胞中相互作用更弱（图1d）。同时内源anti-Trim25 Co-IP实验

第一步，TRPML1是通过泛素蛋白酶体途径降解的 蛋白酶体抑制剂MG132以浓度依赖的方式增强TRPML1的蛋白丰度，而BafaA1对TRPML1没有影响，表明TRPML1是通过泛素蛋白酶体途径降解的（图1a）。 第二步，β-TrCP可能是TRPML1泛素化的主要E3连接酶 Co-IP实验显示，β-TrCP过表达上调TRPML1泛素化水平，β-TrCP ΔF的失活体则不能（图1c）；此外，下调β-TrCP可降低TRPML1泛素化水平（图1d）。另外，Co-IP分析发现，K48R泛素突变体破坏了TRPML1的多泛素化，而K63R突变体则没有。此外

第一步，筛选调控TRPML的上游分子 为了确定癌细胞中调节溶酶体胞吐的上游途径，选了一个含有644种化合物的激酶抑制剂文库进行筛选（工作量有点大），结果发现：具有抑制功能的小分子大部分是PI3K和AKT抑制剂，其中AKT抑制剂对溶酶体胞吐的抑制作用最强，活化AKT的表达则增强癌细胞中溶酶体的胞吐（图1a-c）。 第二步，确定AKT是TRPML的上游分子 过表达AKT1增加TRPML1的蛋白丰度（图1e），敲减或抑制AKT则降低TRPML1的蛋白丰度（图1f）；不影响TRPML1的mRN

生物科学是近几年发展起来的边沿学科，是社会科技发展的产物。虽然是新兴事物，可是它的出现和存在是科学发展的必然结果，也将在国家、社会的发展进步中起到举足轻重的作用。现在全国已经有一百多所高校设立了生物科学专业，像如中国科技大学和 北京大学等重要综合性大学，并且也提供了相应的进一步深造的机会。 国家、社会对这个专业是有需求的，也很重视，从这个发展趋势来看，这个专业的就业前景还是很可观的，但是，具体

课题组前期研究发现，催化多不饱和脂肪酸(PUFAs)氧合的12-脂氧合酶(ALOX12)是高水平ROS诱导的铁死亡应答的关键因子。在本研究中，PHLDA2是否通过ALOX12的ROS调控系统诱导铁死亡。 第一步，确定ROS铁死亡系统的相互作用分子 通过SFB标签抗体，进行IP-MS和IP-WB发现PHLDA2与ALOX12互作（图1a、b）。进一步通过内源抗体Co-IP双向验证PHLDA2与ALOX12存在相互作用（图1c-d）。而免疫荧光共定位实验发现PHLDA2和ALOX12能够同时共定位于细胞质（图1e），进一步佐证了PHLDA2-ALOX12

第一步，AARS1分别乳酸化YAP和TEADK90和K108位点 乳酸化蛋白质组学KEGG分析富集多种通路，重点集中在Hippo信号通路上，YAP和TEAD1分别在K90和K108位点发生了乳酸化（图1a-b）。IP-WB检测也显示YAP-TEAD发生乳酸化（图1c）。此外，构建YAP K90R和TEAD1 K108R突变体进行IP-WB检测显示没有发生乳酸化（图1d）。另外，葡萄糖剥夺降低YAP-TEAD1的乳酸化水平，而乳酸处理明显恢复其的乳酸化水平（图1e-f）。 第二步，AARS1与YAP-TEAD1相互作用 Co-IP实验发现AARS1与YAP-TEAD1互作（图1g

如题，我找了快两个小时了，还是没找到，只能求助，看文献知道有56个。

之前的研究表明， PHGDH在肝癌中被过度激活，从而促进丝氨酸合成和维持氧化还原稳态。PRMT1的上调使PHGDH的过度活化，从而诱导PHGDH在第236位精氨酸的甲基化和随后的活化。鉴于FBXO7通过泛素介导的降解下调PRMT1，那么FBXO7是否降低PHGDH的甲基化和活性？ 第一步，FBXO7通过下调PRMT1抑制PHGDH甲基化 IP-WB实验发现，发现FBXO7敲减显著提高PHGDH的甲基化水平，同时增加PRMT1的表达（图1f）；相反，FBXO7高表达降低PHGDH甲基化水平和PRMT1的表达（图1g）。此外，IP-WB

我是生物专业的一名硕士，一言难尽，08年到23年，15年时间过去了，关于08年所说的就业问题依旧存在，一句21世纪是生物的世纪，哄骗了多少青年才俊涌入这个行业，但是却不出台相关政策支持，我们大学老师，大多是他们那个年代成绩最优秀的一批人，选择继续深造的，读了博士去高校当老师，没继续深造的也不知道现在在从事什么职业，我的建议就是逐渐缩少生物专业的招生，择优选择有兴趣的继续深造完成科研任务，不要再让更多懵懂少年再

作为一个生物科学本科今年刚毕业的人，来说一下自己的感想 出来半年还没找到稍微适合一点的工作，有苦说不出

我就是今年刚被生物科学专业录取的新生。在看了那么多关于这个专业的评论后，我并没有为自己的选择后悔苦恼。反而，我更加雄心勃勃。我知道中国现在的

第一步，探讨PRMT1在肝细胞癌中上调的机制 已有结果显示，PRMT1的蛋白水平在HCC中上调，但PRMT1 mRNA水平没有变化。推测泛素-蛋白酶体降解可能参与PRMT1的上调。用两种不同的蛋白酶体抑制剂处理细胞，发现PRMT1蛋白水平呈剂量依赖性增加（图1a），表明PRMT1的蛋白水平可以通过泛素介导的降解来调节。 第二步，确定PRMT1降解的关键泛素连接酶 根据设计的筛选策略，E3泛素连接酶FBXO7为候选互作蛋白（图1b-c）。IP-MS分析显示FBXO7是前10个与PRMT1相互作用的候

基于TCGA、GEO肺腺癌数据集，使用ssGSEA分析发现NSD3与糖酵解呈负相关（图1a）。过表达或敲除NSD3发现，NSD3抑制糖酵解酶（图1b-c）。此外，NSD3能抑制乳酸生成和葡萄糖消耗（图1d-g）。进一步挽救实验表明NSD3通过抑制HK2来抑制LUAD的糖酵解（图1h-i）。 更多详细内容分享请查阅：【《Adv Sci》老树新花：组蛋白甲基转移酶的非表观功能！NSD3在抑制肺腺癌糖酵解中的作用机理】。 如有相关机制研究，包括免疫沉淀试验（IP、RIP、CHIP、CHIRP）和蛋白组芯片检测

第一步，初步确定OTUD5潜在的底物蛋白 作为去泛素化酶（DUB），OTUD5通过去泛素化底物蛋白起作用。利用IP-MS鉴定潜在的互作蛋白（图1a）。质谱鉴定的前15个潜在结合蛋白中，TAK1被证实在足细胞炎症和DKD进展中具有关键的调节作用（图1b）。因此，假设OTUD5通过去泛素化TAK1在足细胞中负调控炎症和损伤。 第二步，确定TAK1与OTUD5相互作用 内源性Co-IP实验证实，OTUD5与TAK1在细胞和小鼠肾组织均存在相互作用（图1c-d）。同时，外源性Co-IP实验也显示，OTUD5与T

糖尿病肾病（DKD）是一种普遍存在的慢性肾脏疾病，是终末期肾病进展的主要原因。足细胞是覆盖GBM外表面的高度分化的上皮细胞，对于维持GBM的完整性至关重要。因此，足细胞损伤的程度通常用来评估DKD的进展。此外，足细胞中的炎症积聚与足细胞损伤的加重密切相关。 2024年6月，温州医科大学梁广团队在Nat Commun（IF=14.7）上，发表“Podocyte OTUD5 alleviates diabetic kidney disease through deubiquitinating TAK1 and reducing podocyte inflammation and injury”的研究成果。揭示

专业能用的！！！

AARS1作为一种蛋白质乳酸转移酶，使用乳酸作为直接的乳酸供体 第一步，AARS1与乳酸存在结合 分子对接预测乳酸可以很容易地结合到AARS1的催化口袋上（图1a）。等温滴定量热法验证了该结果（图1b）。 第二步，确定AARS1是一种乳酸转移酶 体外乳酸化实验，显示AARS1能够以依赖于乳酸和ATP的方式直接使组蛋白H3和H4乳酸化（图1c）；质谱分析，显示AARS1能直接在K18处乳酸化H3肽（图1d）。AARS1催化袋内氨基酸残基突变体（5M）消除了其乳酸转移酶活性（图1c-d

UBE2C促进SNAT2的单泛素修饰，抑制其多泛素修饰。 检测步骤： 第一步，筛选UBE2C蛋白底物SNAT2 IP-MS和泛素蛋白质组学检测发现：SNAT2是UBE2C泛素修饰的底物（图1a）。 第二步，UBE2C与SNAT2相互作用 Co-IP等实验检测证实UBE2C与SNAT2相互作用（图1 b-c）。 第三步，发现UBE2C促进SNAT2的单泛素化，阻断K63连接的泛素链的延伸 Co-IP分析显示发现UBE2C促进SNAT2的单泛素化，但阻断了泛素链的延伸（图1 d-e）。分别构建不同泛素突变体Ub-WT,K6R,K11R,K 27R, K29R, K33R，K48R，K63R(基

使用HA-Ub-WT/KO泛素修饰系统检测修饰类型：使用HA-Ub-WT和HA-Ub-KO（K6，K11，K27，K29，K33，K48和K63）载体，分别与泛素连接酶（E3）和修饰底物共转染细胞，通过CoIP-WB检测底物泛素化水平，明确泛素连接酶对修饰底物的泛素修饰类型。或再次使用HA-Ub-WT（K6R，K11R，K27R，K29R，K33R，K48R和K63R）载体，分别与泛素连接酶（E3）和修饰底物共转染细胞，通过CoIP-WB检测底物泛素化水平，再次明确泛素连接酶对修饰底物的泛素修饰类型。 使用靶蛋白修饰位点突变鉴定

ChIP-Seq检测和ChIP-qPCR验证要点： （1）实验设计：尽量进行实验组别设计和生物学重复检测，提高后续验证的阳性率。常规过表达单组（Ab IP vs IgG IP）；动态互作组学（实验组vs对照组vs IgG组）。根据目的设计适当的生物学重复。如果后续以ChIP-Seq数据进行互作组标准分析，则需要3-4组生物学重复；如果后续以寻找关键互作DNA片段，进行深入的机制研究，则建议1-2次生物学重复。根据经验，单次重复假阳性率达90%。ChIP-Seq强烈建议设置实验组别和生物学